超低分子量蛋白电泳试剂盒（非变性）（货号：RTD6121）
● 产品组成：
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组分货号
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组分
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名称
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规格
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贮存
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运输
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RTD6121-01
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组分1
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2×多肽电泳浓缩胶缓冲液
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15 ml
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4℃
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常温
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RTD6121-02
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组分2
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2×多肽电泳分离胶缓冲液
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30 ml
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4℃
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常温
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RTD6121-03
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组分3
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2×PAA溶液 超低浓缩胶用
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15 ml
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4℃
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常温
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RTD6121-04
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组分4
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2×PAA溶液 超低分离胶用
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30 ml
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4℃
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常温
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AP020P
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组分5
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10% APS（干粉）
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5 ml
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常温
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常温
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TA0761-01
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组分6
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TEMED
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0.5 ml
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常温
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常温
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CB020P
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组分7
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10×Tris-Tricine电泳缓冲液 (10×TT)
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500 ml（干粉）
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常温
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常温
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TP070
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组分8
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2×Tricine 上样缓冲液（非变性，非还原）
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1 ml
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-20℃
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常温
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RTD6202-02
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组分9
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FastBlue蛋白染色液
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500 ml
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常温
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常温
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● 产品简介：
本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳（多肽电泳）全套试剂，可以用来检测非变性条件下1-20 kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶（8×10cm）。具有以下特点：
1 配套试剂不含任何变性剂如SDS和还原剂如DTT或巯基乙醇，适用于非变性电泳。
注：凝胶和电泳缓冲液pH在8.3左右，非变性电泳适于检测等电点小于8.3的蛋白，等电点近似或大于8.3的碱性蛋白不适合检测。
2 分辨率高：凝胶缓冲液独特配方，可以有效分离1-5 kD多肽。
3 使用方便：配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝胶。
● 贮存和效期：
按照标签温度贮存；开封后有效期一年。
● 使用说明：
一. 10% APS配制：
10% APS配制-5 ml：将APS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
二. 制胶：
I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
表一 （一块1 mm mini胶用量）*
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分离胶
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浓缩胶
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18％T /5 ml
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5％T /2 ml
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2×多肽电泳浓缩胶缓冲液
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/
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1 ml
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2×多肽电泳分离胶缓冲液
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2.5 ml
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/
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2×PAA溶液 超低浓缩胶用
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/
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1 ml
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2×PAA溶液 超低分离胶用
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2.5 ml
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/
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10％APS
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25-50 μl**
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20-30 μl
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TEMED
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2.5-5 μl
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2 μl
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注： * 如非必须，不要使用厚度1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。
表二 凝胶制备凝固时间表
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环境温度
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20℃
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25℃
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分离胶配制
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浓缩胶配制
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分离胶配制
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浓缩胶配制
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分离胶配制量
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5 ml
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-
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5 ml
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-
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浓缩胶配制量
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-
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2 ml
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-
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2 ml
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10%APS
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50 μl
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20 μl
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25 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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2.5 μl
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2 μl
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凝固时间
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5-10 分钟
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20-30 分钟
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5-10 分钟
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20-30 分钟
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2．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层，使凝胶表面保持平整。
3．静置5-10分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的乙醇层，用滤纸将残留的乙醇吸去。
1．按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
2．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
3．静置20-30分钟待凝胶聚合
三. 电泳：
1. 10×Tris-Tricine缓冲液配制：
将10×Tris-Tricine缓冲液（10×TT）粉末（Cat No：CB020P）置于一干净的一升烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500ml 10×TT缓冲液。
表三 1×TT缓冲液配制
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1×TT配制量 500 ml
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1×TT配制量 1000 ml
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10×TT
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50 ml
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100 ml
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超纯水
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450 ml
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900 ml
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注：伯乐Mini
III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TT缓冲液。
2. 样品处理：
待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液（非变性，非还原）[Cat No：TP070]等体积混合，不要加热，上样。蛋白Marker选择非变性专用Marker，根据说明书使用。将电泳槽的内槽加满1×TT缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品（已经过处理）加入点样孔，稳压电泳（表四），至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。
表四 多肽电泳条件
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恒电压
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150V
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起始电流
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60-75mA/板胶
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结束电流
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15-25mA/板胶
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电泳时间
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2.5-3小时
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四. 染色（使用组分9-FastBlue蛋白染色液）：
4.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，蒸馏水漂洗一次；弃水，加入适量染色液（以刚
刚覆盖过胶面为适），条带1-2分钟即可见。
4.2 摇床上常温摇动10-15分钟至条带清晰；观察结果。
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