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JM109化学克隆感受态细胞

JM109化学克隆感受态细胞

产品编号:RTX301

产品规格:50×100ul

数量
价格 ¥1000


JM109化学克隆感受态细胞

目录号:RTX301

储存条件:-70℃冻存六个月

产品包装:

货号

RTX301-04

JM109

50×100ml

Competent cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)

10μl

产品简介:

本公司生产的JM109感受态细胞采用经特殊工艺处理得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测,转化效率可达108cfu/μg,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

JM109菌株介绍:

基因型:endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]

特点:用于蓝白斑筛选;recA1和 endA1 的突变有利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒DNA 的提取。

操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)

1取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

以下实验以100 μl感受态细胞为例。

2   向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50 μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30分钟。

3   将离心管置于42℃水浴中放置45秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3分钟,该过程不要摇动离心管。

4   向每个离心管中加入500 μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5将离心管内容物混匀,吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12—16小时。

注:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200—300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项:

1. 感受态细胞应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免感受态细胞的转化效率。

2. 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

3. 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。



 
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