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RNA尿素PAGE电泳试剂盒

RNA尿素PAGE电泳试剂盒

产品编号:RTE4103

产品规格:60次

数量
价格 ¥800

RNA尿素电泳推荐电泳Marker:单链RNA Marke(货号:RTM505)

                     RNA尿素PAGE电泳试剂盒(货号RTE4103 

RNA Urea PAGE Electrophoresis Kit

 产品组成:

序号

货号

名称

规格

保存条件

1

RTE4103-01

40%PAA(29:1) RNase-free

100 ml

4

2

RTE4103-02

10×TBERNase-free

500 ml

RT

3

RTE4103-03

尿素(电泳级)

220 g

RT

4

RTE4103-04

RNase-free

100 ml

4

5

RTE4103-05

2×RNA上样缓冲液

(尿素变性胶,RNase-free)

1 ml

-20

6

RTE4103-06

RNA核酸染料

0.5 ml

4

7

AP020P

APS(干粉)

5 ml

RT (配制后-20贮存)

8

TA0761

TEMED

0.5 ml

4,避光

9

说明书

一份

● 产品简介:

核酸尿素 PAGE 电泳是研究寡核苷酸和RNA电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸或RNA片段,理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。

本公司提供的RNA尿素PAGE电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制各种浓度的PAGE胶,使用方便。

按照每次制备7 ml 8%凝胶(大小10×8cm,1mm厚度)计算,试剂盒可使用至少60次。

● 贮存和运输:

    试剂盒按照标签温度贮存,有效期一年。试剂盒常温运输。

● 使用说明:

一、制备凝胶:

10% APS配制-5 ml

将0.5 gAPS干粉溶于5 ml RNase-free水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

1.1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。

1.2.分离胶配制:根据表格一,将不同体积的成分混合,漩涡搅拌至尿素彻底溶解。

表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml,适用于厚度1.0 mm小板胶)

RNA长度

最佳凝胶浓度

尿素()

40%PAA

29:1

10×TBE

RNase-free

10%APS

TEMED

200-1000 nt

5%

2.1

0.625 ml

0.5 ml

至体积5 ml

50 μl

5 μl

50-400 nt

8%

2.1

ml

0.5 ml

至体积5 ml

50 μl

5 μl

30-300 nt

10%

2.1

1.25 ml

0.5 ml

至体积5 ml

50 μl

5 μl

40-200 nt

12%

2.1

1.5 ml

0.5 ml

至体积5 ml

50 μl

5 μl

10-150 nt

15%

2.1

1.875 ml

0.5 ml

至体积5 ml

50 μl

5 μl

6-100 nt

20%

2.1

2.5 ml

0.5 ml

至体积5 ml

50 μl

5 μl

1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层,使凝胶表面保持平整。

1.4静置10-20分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合。

注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

1.5去除覆盖在分离胶上的水层;按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合;最后加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml,适用于1.0mm厚度胶)

各组份体积(ml

尿素

40%PAA29:1

10×TBE

RNase-free

10%APS

TEMED

0.84

0.2 ml

0.2 ml

补至体积2 ml

20 μl

2 μl

1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端;将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

1.7常温静置30-60分钟,等待浓缩胶聚合。

注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

二、电泳:

2.1. 预电泳:拔出梳子,1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次,去除残余的尿素。电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。

注:试剂盒配套的10×TBE缓冲液和RNase-free水仅够配制凝胶用,1×TBE电泳缓冲液原料和RNase-free水请自己准备,配方如下:

终浓度

顺序

原料

1

89 mM

1

Tris [MW121.14]

10.8 

54

2 mM

2

EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]

0.744 

3.72

89 MM

3

硼酸 [MW61.83]

5.5 

27.5

 

4

RNase-free水最后定容至

 

 

最后pH8.2-8.3之间,可以不用调节pH,记录每批pH

2.2. 取 3-5 μl样品,加入等体积2×RNA上样缓冲液,70℃处理5分钟后立即冰浴,上样。

2.3.  连接电源线,打开电源开关,按照以下条件电泳。

 

恒电压

起始电流

结束电流

电泳时间

适用条件

推荐电压

200V

15-20 mA/板胶

8-15 mA/板胶

50+ min

最佳电压,最优的分辨率

2.4.  根据下表溴酚蓝指示前沿位置判断条带位置,取出凝胶进行后续实验。

变性胶浓度

溴酚蓝

二甲苯菁

5%

35 nt

130 nt

8%

19 nt

75 nt

10%

15 nt

55 nt

12%

12 nt

55 nt

15%

10 nt

52 nt

20%

5 nt

50 nt

三、染色:

3.1染色液配制:取一合适的容器,加入100 ml 1×TBE,随后加入10 μl RNA核酸染料混匀。

3.2 染色:取下凝胶放入染色液中,常温下摇床轻轻地摇动凝胶染色,最佳的染胶时间为15-20 分钟,这取决于凝胶的厚度、聚丙烯酰胺的浓度和 RNA 的长短。凝胶越厚或聚丙烯酰胺的浓度越高,染色所需要的时间就越长。注:染色溶液至少可重复使用2-3次。如果不立即再用的话,建议将用过的染色溶液冷藏避光保存。

3.3 观察:紫外灯下观察条带。


 
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