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Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒(U型板3-12%预制胶,通用型)

Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒(U型板3-12%预制胶,通用型)

产品编号:RTD6139-0312

产品规格:3-12%

相关规格:
数量
价格 ¥1500

Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒

   Blue/Clear Native PAGE Electrophoresis Kit  Ver.730852

货号

名称

包装

RTD6139-0312

Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒(U型板3-12%预制胶,通用型)

10

RTD6139-0416

Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒(U型板4-16%预制胶,通用型)

10

货品内容:

组份

货号

名称

规格

保存

1

RTD6138-0312

3-12% RealPAGE Native BN/CN 预制胶

10

4

RTD6138-0416

4-16% RealPAGE Native BN/CN 预制胶

10

4

2

BC500P

10×BN/CN PAGE电泳缓冲液(干粉)

500 ml

RT

3

PL114

4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液

1 ml

-20

4

BC270

2% G-250染料(电泳用)

20 ml

4

5

BC260

5% G-250染料(上样用)

1 ml

4

6

说明书

一份

产品简介:


Blue/Clear Native PAGE(BN/CN-PAGE)是一种从生物样品(质膜,胞浆等)中分离分子量10 kD-10 M kD 范围的蛋白质复合物的电泳技术。其原理是用温和去污剂(如 DDM,digitonin)将蛋白复合体从细胞膜中以近似天然的状态分离出来,Blue Native PAGE (BN-PAGE)是用考马斯亮蓝 G-250 代替 SDS与蛋白结合而使其带负电荷,根据蛋白分子量不同在 PAGE胶中得到分离;Clear Native PAGE(CN-PAGE)是电泳缓冲液中不加入任何染料,电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态,然而,其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外,BN-PAGE由于考马斯亮蓝G-250存在,使蛋白都覆盖上负电荷,可以分离碱性蛋白(pI>7);而CN-PAGE只适合于酸性蛋白(pI<7)的分离。

本产品包括BN/CN-PAGE制胶的所有成分,方便使用。可以用于分离分子量在 10 kD-10M kD 的蛋白复合体,样品可以来于胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等。电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化、蛋白活性检测等分析实验,也可直接用于电洗脱制备蛋白。

● 运输和贮存:

本产品常温运输;组份按照标签温度贮存;有效期一年。

使用说明:

1. 样品制备:

   该试剂盒不含样品制备的相关试剂,根据样品种类选择不同提取方法。植物类囊体BN样品制备可以选择植物类囊体膜提取试剂盒(货号:RTU5002);动物总蛋白BN样品制备可以选择动物胞浆活性蛋白提取试剂盒(货号:RTD8106);动物膜蛋白BN样品制备可以选择动物膜蛋白提取试剂盒(货号:RTD8111,RTD8112);动物线粒体BN样品制备可以选择动物线粒体提取试剂盒(货号:RTD8115和RTD8116)。


2. 电泳:

2.1 拆开预制胶包装,将预制胶安装在合适的电泳槽中。

注:伯乐Mini IIIMini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向(下图)。


六一其他系列,君意东方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。

不兼容Thermol系列电泳槽。

2.2 准备电泳缓冲液:

将10×BN/CN PAGE电泳缓冲液(干粉)溶于500 ml灭菌水中,彻底溶解,测定pH应为7.0左右,不要调节pH。用前稀释10倍即配成1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。

2.2.1 CN-PAGE电泳:

阳极缓冲液和阴极缓冲液均直接使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液进行电泳。

2.2.2 BN-PAGE电泳:

阳极缓冲使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液,阴极缓冲液按照下表配制:

 

1×蓝色阴极缓冲液

 

150 ml

10×BN/CN PAGE电泳缓冲液

15 ml

2% G-250 染料(电泳用)

1.5 ml

超纯水

定容至150 ml

2.3准备样品:

2.3.1 CN-PAGE电泳:

总体积

10 μl

蛋白样品

x μl

4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液

2.5 μl

超纯水

补至10 μl

 

不要加热

2.3.2 BN-PAGE电泳:

2.3.2.1 植物类囊体膜蛋白电泳:

总体积

10 μl

 

含去垢剂样品*

植物类囊体膜蛋白样品

2%DDM增溶)

x μl

4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液

2.5 μl

5% G-250染料(蛋白上样)

1 μl

超纯水

补至10 μl

 

不要加热

*植物类囊体膜蛋白电泳中,含去垢剂样品中染料加入按照以下原则:

植物类囊体样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/4。例如样品中DDM(n-Dodecyl β-D-maltoside,β-DM, n-十二烷基-β-D-麦芽糖苷)终浓度为2%,则需要G-250终浓度为0.5%。10 μl蛋白样品中需要加5% G-250染料1 μl。

2.3.2.2 动物线粒体BN样品电泳:

总体积

10 μl

 

含去垢剂样品*

动物线粒体BN样品

1%DDM增溶)

x μl

4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液

2.5 μl

5% G-250染料(蛋白上样)

0.25 μl

超纯水

补至10 μl

 

不要加热

*动物线粒体BN样品电泳中,含去垢剂样品中染料加入按照以下原则:

动物线粒体BN样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/8。例如样品中DDM终浓度为1%,则需要G-250终浓度为0.125%。10 μl蛋白样品中需要加5% G-250染料0.25 μl。


2.4电泳过程;

2.4.1 CN-PAGE电泳:

电泳内外槽均使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×BN/CN PAGE电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻拨出预制胶梳子,用1ml吸头冲洗加样孔3次,随后在电泳槽外槽加入适量的1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。

CN-PAGE电泳

恒电压

起始电流

结束电流

电泳时间

120V

10-15mA/板胶

4-10mA/板胶

50+min

注:冰浴电泳

2.4.2 BN-PAGE电泳:

BN-PAGE电泳外槽使用1×BN/CN电泳缓冲液;内槽开始电泳使用的是1×蓝色阴极缓冲液,冰浴电泳,等待电泳指示前沿到达凝胶1/3处时,将电泳缓冲液更换为1×BN/CN电泳缓冲液,继续后续电泳,因为过多染料会影响蛋白在凝胶中的迁移以及蛋白后续的转膜实验。

BN-PAGE电泳条件(一板胶)

恒电压

起始电流

电泳时间

缓冲液

 

120 V

8-15 mA

20-25 min

1×蓝色阴极缓冲液

冰浴电泳

                        指示前沿至凝胶顶部三分之二处,更换内槽缓冲液为1×BN/CN 电泳缓冲液

恒电压

继续电泳时间

结束电流

缓冲液

 

120 V

45 min +

3-5 mA

1×BN/CN电泳缓冲液

冰浴电泳

3. 转膜:

BN-PAGE转膜必须用PVDF膜,不能用NC膜,因为NC膜与G-250结合非常紧密,不易去除。转膜后PVDF膜上的蓝色染料可以用无水甲醇漂洗去除。转膜缓冲液推荐使用10×BN转膜缓冲液(货号:BC600P)。

4. 染色:

4.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,加入适量FastBlue蛋白染色液或常规考马斯亮蓝染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),条带1-2分钟即可见。

4.2 摇床常温摇动10-15分钟至条带清晰可见。

4.3 加入适量蒸馏水脱色,期间更换1-2次蒸馏水,摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。

4.4 观察保存结果。

5. 实验示例:

BN-PAGE 3-12% Precast Gel
稳压120V 1.5 h 1×BN/CN电泳缓冲液 冰浴电泳

BN-PAGE 4-16% Precast Gel
恒压 120V 2 h 1×BN/CN电泳缓冲液 冰浴电泳



K562 膜蛋白BN-WB检测
样品:膜蛋白提取样品用2%DIG和1%DM增溶( 货号:RTD8111,动物膜蛋白提取试剂盒(细胞)) ,
胞浆蛋白CY做对照
电泳:3-12% BN预制胶(货号:RTD6138-0312),稳压200V 1×蓝色阴极缓冲液至指示前沿距离胶上沿2/3处,
更换为无色1×BN/CN PAGE电泳缓冲液,电泳时间共83分钟
胶预处理:胶浸泡于buffer中(12.5mM Tris,2%SDS,20%甘油,50mM DTT pH6.8),微波煮沸20秒,37度15min后转膜
转膜:0.45μm PVDF膜,10×BN转膜缓冲液(货号:BC600P)稀释为1×BN转膜缓冲液加20%甲醇,
恒流200mA  2小时,未冰浴。
转膜效果检测:膜用丽春红染色液染色(货号:RTD6301)有可见条带,胶用FastBlue蛋白染色液染色
(货号:RTD6202)几乎无条带,证明转膜成功。膜用无水甲醇清洗5分钟去除膜上蓝色残余。
封闭:Western快速封闭液(货号:WR5020)  RT  封闭10 分钟;
图1 一抗:兔单抗GAPDH 1:10000  RT 60min;羊抗兔IgG-HRP 1:5000 RT 60min,ECL曝光6秒
图2 膜使用Western一抗二抗去除液(弱碱,温和型)(货号:WS1200)37度15min,快封10分钟,
一抗:兔Na-K ATPase 1:5000  RT 60min,羊抗兔IgG-HRP 1:5000 RT 60min,ECL曝光1秒




Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒(RTD6139/RTD6138)

使用该产品发表部分文章列表:

1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b is a global organellar RNA editing factor, required for normal fruit development in tomato plants

Author: Jinyan Li, Keru Wang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji, Liqun Ma, Ke Cheng, Oren Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu, Daqi Fu, Yunbo Luo, Hongliang Zhu

Journal: New Phytologist  2023,Volume237, Issue4,February 2023,Pages 1188-1203

Institution China Agricultural University

Paper linkhttps://doi.org/10.1111/nph.18594

 

2. [2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1, functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella

Author: Xinyan Geng,Huijuan Jin, Lan Xia.Binbin Wang,Suren Chen

Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024) 81:118 

Institution: Beijing Normal University

Paper linkhttps://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3

 


 
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