2×CTAB提取缓冲液
● 产品编号及规格：
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货号
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名称
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规格
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贮存
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RTG2405-200ml
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2×CTAB提取缓冲液
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200 ml
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RT
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RTG2405-500ml
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2×CTAB提取缓冲液
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500 ml
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RT
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BME
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还原剂
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1 ml
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RT
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说明书
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一份
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● 产品介绍：
CTAB
(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7
M NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入醇（乙醇或异丙醇）沉淀即可使核酸分离出来。
2×CTAB提取缓冲液成分：2%(w/v)CTAB，100mM Tris (pH 8.0)，20mM EDTA,1.4 MNaCl,，还原剂(随用随加) 。
● 储存及运输：
常温贮存2年；常温运输。
● 实验操作步骤：
一 DNA提取：
1. 2×即用型CTAB提取液配制：
按照终浓度0.2% （v/v）加入还原剂，如1 ml 2×CTAB提取缓冲液中加入2 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。
2. 材料研磨：
取0.2-0.5克新鲜植物材料，于液氮中研磨成粉末。
3. 样品裂解：
按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取缓冲液的比例将粉末转入1.5
ml离心管中，立即加入65℃预热的2×即用型CTAB提取缓冲液，65℃水浴30分钟，间歇混匀。
注：提取缓冲液使用量不要超过0.7 ml，否则后续纯化不能在一个离心管内完成；CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
4. 离心去杂质：
14000 g 常温离心5分钟，转移上清至新的1.5 ml离心管中。
5. 去除RNA：
上清中加入1/100上清体积的RNaseA溶液（10
mg/ml）（货号：RN001），如500
μl上清中加如5 μl RNaseA溶液，37℃处理20分钟。
6. 第一次抽提纯化：
6.1 步骤5溶液中加入等体积的DNA抽提溶液I（25:24:1）（货号：PC1015），轻缓颠倒离心管混匀8-10次，常温14000 g 离心10分钟，保留上清。
6.2. 重复抽提一次。
7. 第二次纯化：
上清中加入等体积核酸抽提溶液（24:1）（货号：PC1017），颠倒离心管混匀8-10次，常温14000 g离心10分钟，保留上层水相。
8. 沉淀DNA：
8.1 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中，加入0.6倍体积的冰冷异丙醇，轻柔混匀，-20℃静
置30分钟；
8.2 14000
g4℃离心10分钟。
9. 漂洗DNA：
9.1
去上清液, 加入1ml
70%乙醇漂洗沉淀，4℃14000 g 3分钟，吸弃乙醇。
9.2 4℃ 14000 g 1分钟，用移液器吸尽残余乙醇，超净台吹干沉淀。
注：沉淀不能彻底干燥，否则不好溶解。
10. 贮存DNA：
加入50-100
μl的超纯水或TE缓冲液（货号：TE1050）溶解DNA，-20℃保存备用。
二 RNA提取：
注：以下程序请注意所有试剂都要保证RNase-free。
1. 2×即用型CTAB提取液（RNase-free）（货号：RTG2405F）配制（现用现配）：
2×CTAB提取缓冲液中按照1/1000体积加入DEPC，如100
ml中加入100 μl DEPC，混匀后过夜处理，高温高压，即为2×即用型CTAB提取缓冲液（RNase-free）。按照终浓度1 % （v/v）加入还原剂，如1 ml 2×CTAB提取缓冲液（RNase-free）中加入10 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。
2. 材料研磨：
取0.2-0.5克新鲜植物材料，于液氮中研磨成粉末。
3. 样品裂解：
按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取缓冲液的比例将粉末转入1.5
ml离心管中，立即加入65℃预热的2×即用型CTAB提取缓冲液，65℃水浴30分钟，间歇混匀。
注：提取缓冲液使用量不要超过0.7 ml，否则后续纯化不能在一个离心管内完成；CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
4. 离心去杂质：
14000 g 常温离心5分钟，转移上清至新的1.5 ml离心管中。
5. 第一次纯化：
上清中加入等体积的RNA抽提溶液I（25:24:1）（货号：PC1018），轻缓颠倒离心管混匀8-10次，常温14000 g 离心10分钟。
6. 第二次纯化：
将上清液转入另一1.5 ml离心管中，加入等体积核酸抽提溶液（24:1）（货号：PC1017），颠倒离心管混匀8-10次，常温14000 g离心10分钟。
7. 沉淀RNA：
将上层水相转入新的1.5 ml离心管中，加入1/2体积7.5 M LiCl（RNase-free）（货号：LC1030），轻柔混匀，-20℃ 静置30分钟；14000
g4℃离心10分钟。
9. 漂洗RNA：
9.1 去上清液, 沉淀中加入1ml
70%乙醇（RNase-free），吹打漂洗沉淀，14000 g4℃3分钟，吸弃乙醇。
9.2 14000 g4℃1分钟，用移液器吸尽残余乙醇，超净台吹干沉淀。
注：RNA沉淀不能过分干燥，否则不好溶解。
10. 贮存RNA：
加入50-100
μl的RNase-free水（货号：RF001）溶解RNA，-80℃保存备用。
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