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                       全血基因组DNA小量提取试剂盒

Total Blood DNA Miniprep Kit

● 试剂盒内容及保存：

● 储存条件和效期：

该试剂盒常温贮存，常温运输。开封后有效期一年。

● 产品简介：

全血基因组DNA 小量提取试剂盒可从200-400 μl体积新鲜、冷冻或抗凝全血样本中快速分离纯化基因组DNA。该试剂盒可以在30分钟内完成单个或多个样品的操作。 提取过程无需使用蛋白酶K消化，不需要酚氯仿抽提， 也无需耗时的异丙醇沉淀等过程 。

使用该试剂盒提取到的DNA 可以用于PCR，Southern杂交，酶切消化等实验。

● 准备工作：

1. 准备无水乙醇；1.5 ml离心管；离心机

2. 按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后常温贮存备用。

3. 每次使用前请检查缓冲液DL1和DL2是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

● 标准操作步骤：

如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在常温下离心。

注意：以下方案适用于400 μl体积新鲜或冷冻血液样本。如果使用低于400 μl的全血样本，必须按比例减少缓冲液DL1和DL2的用量或者用1×PBS溶液补齐至400 μl，严格按照缓冲液DL1：全血：缓冲液DL2=3：4：3体积比进行操作，否则将导致后续操作无法进行。

1. 加入300μl缓冲液DL1于1.5 ml离心管中。

2. 加入400 μl抗凝全血，漩涡剧烈震荡30秒。 注：如果低于400 μl血液，用1×PBS补齐到400 μl。

3. 加入300μl缓冲液DL2，剧烈摇动离心管3-5次，漩涡剧烈震荡30秒-60秒。

注：加入缓冲液DL2后，会出现大量血红蛋白沉淀，必须剧烈震荡。

4. 12000 rpm 离心2分钟。

5. 把吸附柱装在2ml收集管中，将第4步得到的上清溶液（一般可吸取650-700 μl）全部转入吸附柱中（小心别触及沉淀），12000 rpm离心2 min，倒弃流出液重新套上收集管。

注：吸附柱的最大体积为850 μl，如上清超过此体积，可分2次离心，保证所有上清都加到柱中。

6.加入500 μl 去蛋白液GB（注意是否已经加入乙醇）至柱子中，12000 rpm离心1min，弃流出液。

7. 将吸附柱重新套回2 ml收集管中，加入700μl 漂洗液PW（注意是否已经加入乙醇）至柱子中，12000 rpm离心1min,倒弃流出液；

8. 再加入500 μl 漂洗液PW（注意是否已经加入乙醇）至吸附柱中，12000 rpm离心1min, 弃流出液。

注：吸附柱膜上如有血色素残余，这是正常现象，不会影响DNA的洗脱和纯度。

9. 将吸附柱重新套回2 ml收集管中，12000 rpm空甩离心2 min以干燥柱子的基质；

注：这一步骤至关重要，不要省略，否则残余乙醇会影响后续酶切或PCR实验。

10. 将柱子置于1.5ml灭菌离心管，向吸附柱O型垫圈中央悬空加入50-100 μl65℃预热的洗脱缓冲液EB或灭菌去离子水，盖好吸附柱管盖，常温静置2 min； 

注： = 1 \* GB3 ① 洗脱缓冲液体积最好不少于50 μl，体积过小影响回收效率。

= 2 \* GB3 ② 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。

11. 12000 rpm离心 2 min洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。

● DNA浓度及纯度检测：

基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

● 常见问题分析：

 实验示例：

400μl human blood gDNA 上样5μl

人血液基因组扩增人β-球蛋白 1.3kb 片段