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 限制级凝血酶

Thrombin, Restriction Grade

● 产品包装：

● 产品简介：

凝血酶（Thrombin）来源于牛血浆，分子量37KD，是由两条肽链（31KD和6KD）通过二硫键组成的。凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶，通常能够有效切割质量比为1:2000的蛋白。凝血酶最佳切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2'（X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸），一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。在凝血酶切割位点和N末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善酶切，通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。

单位定义：1 U在标准切割缓冲液里20℃ 16小时能切割1mg的目的蛋白。

● 保存条件：

-20℃保存，一年有效。

● 使用方法：

1 用0.1ml 1×凝血酶稀释/贮存缓冲液（1×Thrombin Dilution/Storage buffer）（50 mMsodium citrate,200 mMNaCl, 0.1% PEG-8000, 50% glycerol, pH 6.5）彻底溶解1000 U凝血酶粉末，得到凝血酶母液，浓度为10U/μl。

2 用1×凝血酶稀释/贮存缓冲液将凝血酶母液按照1:25,1:50,1:100,1:200进行梯度稀释，稀释液含有大约每μl 0.4U，0.2U，0.1U，0.05U凝血酶。

3 按照下表配制反应液；

4 常温（20-25℃）孵育，2小时，4小时，6小时，8小时分别取样10μl与5×SDS-PAGE上样缓冲液混合后电泳检测，确定酶切程度。