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10×酸性蛋白Native PAGE转膜缓冲液

简介：

10×酸性蛋白Native PAGE转膜缓冲液适用于酸性蛋白电泳后凝胶上非变性酸性蛋白的转膜。本转膜液配制便捷，稀释后无需调节pH值，pH约为9.2。缓冲液主要成分为Tris，甘氨酸和微量SDS。该缓冲液最终可配成10升即用型1×缓冲液（要补加甲醇）。

保存条件：

粉末装常温保存，两年有效。

配制方法：

将10×转膜缓冲液粉末全部溶解于1升超纯水中，彻底溶解，即配成10×转膜缓冲液。根据下表配制成1×即用型转膜缓冲液

使用方法：

1. 酸性蛋白非变性电泳：

各种蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸的数目不同，因而有各自的等电点。凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质称为碱性蛋白，等电点偏碱性，pI＞7，如组蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点就偏酸性，pI＜7，自然界中大多数蛋白都是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候，要利用低 pH 凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高 pH 凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的 pH 是 8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。酸性蛋白电泳可参考使用非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号:RTD6130）。

2. 转膜：

 ① 转膜方法：酸性蛋白在非变性状态的转膜建议用湿转法。

 ② 三明治结构：由于酸性蛋白pI＜7 在碱性转膜缓冲液中带负电荷，转膜三明治结构与传统转膜相同，即根据“黑胶白膜”制作三明治，即膜置于转膜夹芯正极一侧，凝胶置于转膜夹芯负极一侧，这样凝胶上带负电荷的酸性蛋白才能转移到膜上。

酸性蛋白转膜三明治制作：

负极（电转夹黑色面）-海绵垫-3至5层滤纸-凝胶-膜-3至5层滤纸-海绵垫-正极（电转夹白色面）

 ③ 膜的选择：膜可以用PVDF膜或NC膜，根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来，大于20kD蛋白选择0.45μm孔径，低于20kD选择0.22μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化，NC膜只需用转膜缓冲液润湿就可以。

④ 转膜条件：

由于在非变性条件下，不同酸性蛋白的空间结构，聚合状态，电荷数量都有不同，以下转膜条件仅供参考，客户针对自己的目的蛋白，最好经过1-2次预实验后，确定最佳的转膜条件。