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RealECL发光液

● 产品组成：

● 产品简介：

RealECL 是一种超敏ECL化学发光试剂盒，可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶（HRP）发生化学反应，发出荧光，从而可以通过用X光片压片或其它适当荧光成像设备检测样品。RealECL具有极高灵敏度和高信噪比，可检测出10-100 fg的微量抗原；发光迅速，荧光可使X感光胶片感光达12小时以上，特别适用于痕量蛋白检测；另外高灵敏度可以大大节省宝贵的样品以及非常昂贵的一抗和二抗的用量，降低实验成本。

● 贮存：

  2-8℃贮存，有效期一年。

● 注意事项：

1 RealECL A液和B液在吸取过程中必须要更换枪头，A液和B液相互污染后会导致A液或B液逐渐失效，影响后续的使用效果。

2 各溶液使用后，请盖紧瓶盖，以防失效。

3 为获得最佳实验结果，请务必优化实验条件，包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择。

4 由于叠氮钠是HRP抑制剂，在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂；如果二抗中含有叠氮钠，发光实验前要进行5次TBST或PBST漂洗，每次10分钟。

5 在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免蛋白污染产生高背景。

● 使用说明：

1 RealECL工作液的配制：等体积混合适量RealECL A液和B液，室温放置备用。工作液宜在临检测前配制。

2 Western二抗孵育后，并进行数次洗涤后，用平头镊子将膜取出，用滤纸略吸去过多的液体(切勿接触膜的蛋白面)，但不要使膜过度干燥，然后将膜平铺于一洁净保鲜膜上，避免产生气泡。

注：某些市售保鲜膜包裹印迹膜时会淬灭荧光，请选择ECL专用保鲜膜获得更好的实验效果。

3 根据膜的大小，按每平方厘米膜加0.125 ml RealECL工作液的比例，滴加RealECL工作液到膜上，确保使工作液均匀覆盖在膜上，常温放置1-2分钟。

注：为达节约目的可将膜减小但勿降低发光液用量，确保发光液完全覆盖于膜上。

4将保鲜膜折起来完全包裹杂交膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖杂交膜的保鲜膜固定在暗盒内。

5在黑暗中放入X感光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟，显影定影观察冲洗结果。如掌握不好曝光时间，可以在膜上放置3-4张X感光胶片，统一曝光3-5分钟，显影后选择一张曝光最好的胶片。

应用示例：

绿萝总蛋白，RbcL一抗 1：2000，羊抗兔IgG-HRP 1：2000

a PVDF膜用抗体清除液处理后再用RealECL曝光。