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RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit

●  产品货号及规格：

●  产品组成：

●  产品简介：

本试剂盒含有反转录需要的全部试剂（RTScript MMLv Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，dNTP、反应 Buffer，Oligo (dT)₁₈，Random primer）,浓度为5×。进行RNA反转录反应时，只需加入模板和RNase Free H₂O 即可高效合成第一链cDNA，大大简化了操作过程、提高了效率、减少了操作过程中的人为误差。本制品含有去基因组成分gDNA Remover，以RNA为模板进行cDNA第一链合成时，可以同步去除基因组DNA污染，与传统DNaseI消化对比，gDNA Remover消化后无需加入EDTA进行失活；反应结束后，65℃加热2分钟，就可以不可逆失活。具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。该试剂盒采用的反转录酶去除了 RNase H活性，从而避免反转录过程中降解RNA。 同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受50℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应，采用高温反转录可显著打开 RNA二级结构，从而提高复杂 RNA 模板的扩增性能、提高反转录 cDNA的长度（可以获得12 kb cDNA）和产量，从而提高后续检测的灵敏度。合成的第一链 cDNA可广泛用于 2nd Strand 的合成、 杂交、 PCR扩增、Real-Time PCR 反应等。

●  贮存和运输：

开封后-20℃贮存两年；湿冰运输。

●  使用方法：

一. 去除基因组DNA污染：

1.1冰上配制如下体系：

1.2轻柔混匀，快甩离心，37℃处理 2 min，去除基因组污染，冰上放置。

注：若RNA中基因组DNA污染严重，可以延长37℃处理5 min。

1.3 65℃处理2 min，失活gDNA Remover，冰上放置。

二. 第一链cDNA合成（反转录反应）：

2.1冰上配制如下体系：

2.2 反转录：轻柔混匀，快甩离心； 50℃孵育15 min，

2.3 终止反应：85℃孵育 5 min，终止反应。

反应产物可直接用于 PCR，如果不立即使用，-20℃ 保存，长时间保存建议-80℃ 放置。

●  注意事项：

    5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis MasterMix中已经包含Oligo (dT)₁₈和Random primer，不仅适用于包含poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于不含poly(A)结构的原核生物RNA，真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。