植物总蛋白提取试剂盒（适用于模式植物）
Plant Total Protein Isolation Kit（for model plant）
● 产品货号及规格
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产品编号
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名称
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规格
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贮存
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运输
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RTD8102-01
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试剂A-样本杂质去除剂
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20 ml
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常温
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常温
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RTD8102-02
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试剂B-植物蛋白提取缓冲液I
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15 ml
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4℃
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常温
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PC2030-03
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蛋白酶抑制剂混合物（100×,植物样品用）
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0.2 ml
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-20℃
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湿冰
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DT0140
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DTT（100×）
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1 ml
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常温(配制后-20℃)
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常温
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PL080
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5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液
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1 ml
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-20℃
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湿冰
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● 产品简介
本产品用于快速提取模式植物的总蛋白，可以处理各种常见模式植物如拟南芥、小麦、烟草、玉米、水稻等植物的叶片、茎和根等。得到的蛋白可用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。
该试剂盒对模式植物的幼嫩组织有更好的提取效果，衰老组织和富含多糖多酚植物的蛋白提取效果不佳。此类植物的蛋白提取可以选择通用型植物蛋白提取试剂盒（货号：RTD8103）。
该试剂盒含有除丙酮外的其他所有试剂，使用方便，能在2小时内得到高纯度的蛋白样品。
每次提取使用0.7
ml试剂B-植物蛋白提取缓冲液I计算，该试剂盒可以使用20次。
● 使用方法：
实验准备材料：
液氮；研钵；1.5ml离心管；丙酮；70℃水浴锅；干浴器；冷冻离心机；制冰机；涡旋振荡器。
I 样品破碎：
1.
取植物样本（每个样本取0.2-0.5克），在液氮条件下，用研钵充分研磨成粉末。
注：此步骤非常重要，样本研磨越细越好，研磨不彻底会导致蛋白浓度偏低。
II 沉淀杂质：
2.
取1.5 ml离心管，加入1
ml即用型试剂A（按照下表配制），迅速将粉末加入其中，漩涡混匀，RT 放置5分钟。
即用型试剂A-样本杂质去除剂配制
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即用型试剂A
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1个样品
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2个样品
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n个样品
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试剂A-样本杂质去除剂
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0.5 ml
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1 ml
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n×0.5 ml
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丙酮
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0.5 ml
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1 ml
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n×0.5 ml
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DTT（100×）
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10 μl
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20 μl
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n×10 μl
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3.12000g4℃离心5分钟，去除上清，保留沉淀。
注：观察沉淀颜色，如沉淀颜色为绿色，继续步骤4；如沉淀颜色为浅色或白色，跳过步骤4，直接进行步骤5。
4.
沉淀中加入1 ml即用型试剂A，漩涡混匀，RT放置5分钟，12000rpm4℃离心5分钟。
5.
沉淀中加入1 ml 预冷的丙酮（自备，试剂盒不提供）和10 μl DTT溶液，漩涡震荡（此时溶液状态应为白色悬液），彻底重悬，12000rpm4℃离心5分钟，去除上清，收集沉淀。
6.
快甩离心数秒，残留上清用移液器彻底吸弃，沉淀物通风晾干1-2分钟至沉淀干燥。
注：沉淀不能过分干燥，否则会影响以下步骤蛋白的溶解性。
III 蛋白提取：
7.
蛋白沉淀中加入0.7 ml 即用型试剂B（按照下表配制），漩涡震荡，彻底重悬沉淀（此时溶液状态为悬浮溶液）；70℃水浴1小时，间歇混匀。
即用型试剂B-植物蛋白提取缓冲液配制：
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即用型试剂B
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1个样品
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2个样品
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n个样品
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试剂B-植物蛋白提取缓冲液I
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0.7 ml
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1.4 ml
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n×0.7 ml
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蛋白酶抑制剂混合物（100×）
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7 μl
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14 μl
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n×7 μl
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DTT（100×）
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7 μl
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14 μl
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n×7 μl
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8.12000g4℃离心10分钟，小心取上清（通常可取600 μl）于1.5ml离心管中，不要吸取沉淀。
9.
蛋白样品-20℃贮存或进行下游电泳及Western
Blot等实验。
注： ① 如要浓缩蛋白，可以选择蛋白浓缩试剂盒（货号：RTD9101）。
②
由于提取过程中使用了DTT，为了避免对蛋白浓度测定的影响，建议蛋白浓度测定使用Bradford方法（货号：RTP7101）。
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