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梯度凝胶生成系统                    

梯度胶生成系统通过从多板制胶器底部注入凝胶，可在多板制胶器中灌制多达12块厚度为0.75、1.0或1.5mm的凝胶。当灌制凝胶数少于12块时，丙烯模块可充当空间填充物。

多板制胶器兼容市面上多种玻璃板，如伯乐短板和长板玻璃以及U型玻璃板。

一  开箱后确认包装包含以下配件：

1 按照图示将系统连接：

将带接头的硅胶管一端插入到梯度混合仪侧方插口，另一端与蠕动泵下方硅胶管接头连接（蠕动泵溶液方向是一般为下进上出）。蓝色阀门插入到多板制胶器接口，将不带接头硅胶管截取适当长度一端与蓝色阀门连接，另一端与蠕动泵上方硅胶管接头连接。蓝色阀门旋钮方向与硅胶管平行为开启，旋转至与硅胶管垂直方向为关闭。梯度混合仪左侧杆状旋钮与地面垂直为开启，旋转与水平面有夹角为关闭。

2 蠕动泵使用方法：

按照图示调节蠕动泵。灌装速度不要太快。

 3 梯度胶配制：

梯度混合仪加入溶液前，首先把梯度混合仪阀门关闭（旋转旋钮与水平面有夹角为关闭）。

加入溶液原则：左槽（靠近旋钮阀门）加高浓度溶液；右槽（靠近出口）加低浓度溶液。

将磁力搅拌子放入右槽中，打开磁力搅拌器，转动转子。

按照下表配制溶液，以制备4-20% SDS-PAGE 厚度1.0mm梯度胶为例：

4 多板制胶器使用：

使用前将多板制胶器填充块两侧的保护膜揭掉；

准备好制胶用的厚玻片和短玻片。

将厚玻片和短玻片对齐并在短玻片前方放一张分隔片，此为一套玻板三明治组合；

将多板灌胶器放倒，以厚玻板在下的方式放入玻板三明治组合，最多可放12套；

插入密封挡板，在最后一块填充块或者最后一组玻板组合前插入适量的分隔片以保证玻板和填充块压紧，然后拧紧螺丝。

在密封挡板下面小孔插入阀门，并打开阀门（阀门旋钮与硅胶管平行为开启）。

5 灌胶操作：

重要步骤：

灌胶前事先检查：梯度混合仪旋钮是否为开启状态（杆状旋钮与水平面垂直为开启）

磁力搅拌子是否转动

蠕动泵是否为关闭状态

多板制胶器蓝色阀门是否为开启状态（蓝色旋钮与硅胶管平行为开启）

检查无误后，打开蠕动泵，使用a模式，调节数字为25，开始灌胶操作。至多板制胶器中的溶液至顶部接近溢出时，首先关闭多板制胶器蓝色阀门（旋钮与硅胶管垂直为关闭）；

暂停蠕动泵；迅速在梯度混合仪左右槽中加满蒸馏水，打开蠕动泵，彻底冲洗管道。

注：次步骤非常重要，不立即彻底冲洗，残余的凝胶会堵塞梯度混合仪和管道。

仔细插入梳子，尽量一次成功，避免产生气泡。

37℃ 恒温箱中凝固2小时。

注：凝固温度非常关键，当室内温度低于18度时，凝固时间会很长。

6 拆胶：

待凝胶凝固好后，打开多板制胶器螺丝，用胶铲在两板之间轻轻撬动，注意不要误撬玻璃短板，否则将导致玻璃板和胶之间产生气泡，使得凝胶无法使用。用水将每板凝胶冲洗干净，自封袋封好，加入2 ml  1×电泳缓冲液保持润湿，4℃水平放置，可以贮存3-4周。