TBE-尿素-PAGE电泳可以选择RTM501 单链DNA Marker（25-75 nt）作为分子量标准。
DNA尿素PAGE电泳试剂盒（货号RTE4102）
DNA Urea PAGE
Electrophoresis Kit
● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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保存条件
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AC2914
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40%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TB001
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5×TBE
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500 ml
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RT
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RU5080
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尿素（电泳级）
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220 g
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RT
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AP020P
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APS（干粉）
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5 ml
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RT (配制后-20℃贮存)
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TA0761
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TEMED
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0.5 ml
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4℃，避光
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DL080
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2×TBE尿素上样缓冲液 (尿素变性胶)
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1 ml
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4℃
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● 产品简介：
DNA尿素 PAGE 电泳是研究寡核苷酸电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸片段，理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。
本公司提供的DNA尿素PAGE电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制各种浓度的PAGE胶，使用方便。
按照每次制备7 ml 8%凝胶（大小10×8cm，1mm厚度）计算，试剂盒可使用至少60次。
● 贮存和运输：
试剂盒按照标签温度贮存，有效期一年。试剂盒常温运输。
● 使用说明：
一、制备凝胶：
10% APS配制-5 ml：
将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
1.1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
1.2．分离胶配制：根据表格一，将不同体积的成分混合，漩涡搅拌至尿素彻底溶解。
表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于厚度1.0 mm小板胶)
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单链DNA长度
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最佳凝胶浓度
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尿素（克）
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40%PAA
（29:1）
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5×TBE
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补水到总体积
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克
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1 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5
cm的水层，使凝胶表面保持平整。
1.4静置10-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
1.5去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml，适用于1.0mm厚度胶)
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各组份体积（ml）
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凝胶浓度
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尿素
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40%PAA（29:1）
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5×TBE
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灭菌水
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克
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0.2 ml
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0.4 ml
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补水至体积2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
1.7静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二、电泳：
2.1. 预电泳：拔出梳子，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。
注：试剂盒配套的5×TBE缓冲液仅够配制凝胶用，1×TBE电泳缓冲液请自己制备，配方如下：
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终浓度
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顺序
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原料
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1升
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5 升
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89 mM
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1
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Tris碱 [MW121.14]
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10.8 克
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54克
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2 mM
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2
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EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]
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0.744 克
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3.72克
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89 MM
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3
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硼酸 [MW61.83]
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5.5 克
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27.5克
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4
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超纯水最后定容至
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1 升
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5 升
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最后pH在8.2-8.3之间，可以不用调节pH，记录每批pH
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2.2. 取 3-5 μl样品，加入等体积2×TBE尿素上样缓冲液，70℃处理5 分钟后立即冰浴，上样。
2.3. 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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适用条件
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推荐电压
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200V
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15-20 mA/板胶
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10-15 mA/板胶
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60+ min
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最佳电压，最优的分辨率
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2.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。
三、染色：
3.1 单链DNA可以用
单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5103），
核酸PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5102）或
核酸快速银染试剂盒（货号：RTS5101）进行染色。
● 实验示例：
1.
使用单链DNA
PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5103）染色：
2. 使用核酸PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5102）染色：
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