Anti-GAPDH抗体（兔多抗）
Anti-GAPDH Antibody（Polyclonal Antibody from Rabbit）
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产品编号
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产品名称
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规格
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RGA1040
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Anti-GAPDH抗体（兔多抗）
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20 μl
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● 产品简介
甘油醛-3- 磷酸脱氢酶（ Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH） 是糖酵解（glycolysis）过程中的关键酶，分子量为37 kDa左右。它催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化反应。GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中一般是恒定、高水平表达的，常用作Western
Blot实验的内参照。
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来源
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用途及稀释比例
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抗体类型
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GAPDH分子量
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Rabbit
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WB 1:2000-5000
IHC 1:200-1000
IF 1:200-1000
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多克隆抗体
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36-38 kD
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注：WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation;
IF, Immunofluorescence
本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测20次。
● 贮存形式：
稳定溶液，1 mg/ml 抗体溶于PBS，50%甘油，pH7.2。
● 保存及运输条件：
-20℃保存，一年有效；避免反复冻融；湿冰运输。
● 使用说明：
1. Western Blot杂交(ECL显色)：1:2000-5000稀释，常温孵育1-2 h或4℃过夜。
2. 免疫荧光（IF）和免疫组化（IHC）：1:200-1000稀释。
三 实验示例：
Jurkat总蛋白，细胞浆蛋白，细胞核蛋白GAPDH检测
总蛋白提取：4×106 Jurkat细胞，2000 g 离心收集，去上清，沉淀中加入200 μl RIPA（加2 μl 100 mM PMSF），冰上裂解5分钟，4℃ 16000 g 15 分钟，上清即为总蛋白（TP）。
细胞浆蛋白：4×106 Jurkat细胞，2000 g 离心收集，加入400 μl细胞浆蛋白抽提试剂A（加4 μl 100mM PMSF，加0.4 μl 1 M DTT），悬浮沉淀，冰浴15分钟；加入20 μl细胞浆蛋白抽提试剂B，混匀，冰上孵育1分钟，震荡5秒，4℃ 16000g 10分钟，小心收集上清即为细胞浆蛋白（C-Pr），不要触及沉淀。
细胞核蛋白提取：沉淀用200 μl 1×PBS漂洗一次，4℃ 16000 g 2分钟；沉淀中加入200 μl 细胞核蛋白抽提试剂（加2 μl 100mM PMSF，加0.2 μl 1 M DTT），重悬沉淀，剧烈震荡15秒，冰浴40分钟，每间隔10分钟剧烈震荡15秒；4℃ 16000 g 5分钟，上清即为细胞核蛋白（N-Pr）。
电泳：RTD6132-15%3.3C 200V 33-12 mA 55 min
转膜：NC膜，1×RealBlot快速转膜液湿转，稳流400 mA，电压变化64-57 V，转膜时间35 min
封闭：无蛋白快速封闭液RT 20 min
一抗孵育：GAPDH 羊抗兔多抗，一抗稀释液稀释1：2000
二抗孵育：羊抗兔IgG-HRP，二抗稀释液稀释1：5000
检测：ECL发光检测
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