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单链DNA Marker（20-75 nt）                       

● 产品编号及规格：

● 产品简介：

单链DNA  Marker由不同长度的单链DNA分子混合而成，7条带的大小为20，25，30，35，40， 50，75nt。样品保存在 TE缓冲液中，35nt 浓度为0.8μg/μl，其余条带浓度为0.4 μg/μl。使用前与等体积2×TBE尿素上样缓冲液混合即可上样电泳。该Marker适用于跑尿素变性胶，电泳后使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5102），核酸快速银染试剂盒（Cat：RTS5101）或核酸染料染色均可以得到清晰的条带分离效果。

产品内附带2×TBE尿素上样缓冲液（Cat：DL080）。以每次上样5 μl计算，混合好的单链DNA Marker可以使用大约50次。

●  保存条件和运输：

-20℃贮存，有效期24个月；湿冰运输。

● 使用方法：

注：以下使用方法均以8×10cm凝胶 厚1.0mm示例，其他规格凝胶请适当调整。

一. 凝胶制备：

1.1 可以选择DNA尿素PAGE电泳试剂盒（Cat：RTE4102））或按照以下程序制胶：

表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于厚度1.0 mm小板胶)

最后加入10%APS和TEMD后，立即混匀。

1.2在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。

1.3静置10-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

1.4去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml，适用于1.0mm厚度胶)

1.5将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

1.6静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

二. 样品制备：

2.1 取适量体积单链DNA Marker样品与等体积的2×TBE尿素上样缓冲液（Cat：DL080）混合，70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样。待测样品也需要进行同样处理。

三.电泳：

3.1. 预电泳（可选）：电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200V预电泳30分钟。电泳结束后，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。

3.2.上样：根据梳齿确定Marker上样量， 一般是10齿1mm厚梳子上样5 μl，15齿1mm厚梳子上样3 μl。

3.3. 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。

3.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。

四．染色：

用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5102）或核酸快速银染试剂盒（Cat：RTS5101）染色均可以得到清晰的条带分离效果。

注：如果使用核酸染料染色，RealSafe Red（货号：GR002）或RealSafe All（货号：GR004）核酸染料结合单链核酸效果最佳，强烈建议使用以便获得最佳效果的胶图。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。

● 注意事项：

1. 单链DNA Marker产品适用于变性PAGE垂直电泳，不适用于水平琼脂糖凝胶电泳。

● 电泳示例：

1. 使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5103）染色：

2. 使用核酸PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5102）染色：

3. 使用RealSafe Red核酸染料（货号：GR002）染色：